兔血清总补体elisa试剂盒操作方法

　　兔血清总补体ELISA试剂盒是一种常见的实验试剂盒，可以用于检测血清中的总补体含量。在医学、生物学和医药工业领域中广泛应用。
 
　　一、试剂盒组成
 
　　1. 酶标板:一枚96孔ELISA酶标板。
 
　　2. 标准样品:兔血清补体标准溶液。
 
　　3. 洗涤缓冲液: 20倍浓度的洗涤缓冲液，用于洗涤酶标板。
 
　　4. 加样缓冲液: 10倍浓度的加样缓冲液，用于稀释血清等样品。
 
　　5. 检测抗体: 抗兔IgG辣根过氧化物酶标记二抗。
 
　　6. 底物液: tetramethyl benzidine (TMB)显色底物。
 
　　7. 停止缓冲液: 2mol/L硫酸，停止底物的显色反应。
 
　　二、试验原理
 
　　兔血清总补体ELISA试剂盒是一种竞争性ELISA法。样品中的总补体和免疫吸附板上的固定抗原竞争结合检测抗体的酶标记二抗。未结合的检测抗体被洗去，添加底物后，检测抗体上的酶标记将被底物催化，使底物发生显色反应，得到颜色的强度与血清中总补体浓度成反比。
 
　　三、操作方法
 
　　1. 准备涂层抗原溶液：将涂层抗原(血清补体标准溶液)稀释至适当浓度(建议500ng/ml)，加入96孔的酶标板中，放置在4℃下过夜。
 
　　2. 样品和标准品制备：样品和标准品需用10倍的加样缓冲液稀释至合适浓度。
 
　　3. 加样：将10ul的稀释样本分别加入微孔板孔中，每个孔分别加入200ul的稀释后的检测抗体。
 
　　4. 孵育：在37℃孵化1小时。
 
　　5. 洗涤：用洗涤缓冲液洗涤板孔4次，每次吸去液体后吸起余液，以避免固体物沉积于底部。
 
　　6. 染色：加入50ul的底物液，在室温下静置15min。
 
　　7. 停止反应：加入50ul的停止缓冲液终止反应，样品变成黄色。
 
　　8.检测测量：在450nm波长下，测量每个孔的OD值。
 
　　兔血清总补体elisa试剂盒在ELISA中，进行各项实验条件的选择是很重要的，其中包括：
 
　　1、酶标记抗体工作浓度的选择：首先用直接ELISA法进行初步效价的滴定(见酶标记抗体部份)。然后再固定其它条件或采取“方阵法”(包被物、待检样品的参考品及酶标记抗体分别为不同的稀释度)在正式实验系统里地滴定其工作浓度。
 
　　2、酶的底物及供氢体的选择：对供氢体的选择要求是价廉、安全、有明显地显色反应，而本身无色。有些供氢体(如OPD等)有潜在的致癌作用，应注意防护。有条件者应使用不致癌、灵敏度高的供氢体，如TMB和ABTS是目前较为满意的供氢体。底物作用一段时间后，应加入强酸或强碱以终止反应。通常底物作用时间，以10-30分钟为宜。底物使用液新鲜配制，尤其是H2O2在临用前加入。
 
　　四、结果分析
 
　　根据标准品法建立标准曲线，通常将标准品的OD值作为Y轴，标准品中总补体的浓度作为X轴，利用标准曲线把样本的OD值转换成总补体浓度，得出样本中的总补体浓度。
 
　　五、存储方法
 
　　1.试剂盒应贮存在4℃下，干燥避光处，有效期为12个月。
 
　　2.未开封的试剂盒中，如不含标明冷冻于何处的冷冻品，则均须冷冻保存，冻存期不超过1年。
 
　　3.已开封的试剂盒中，可能存在供一次实验的各个试剂用量不匹配、特殊情况下洗板的洗涤次数、缓冲液和标准品等物品的采样后的使用均可能影响其稳定性。因此，我们强烈建议我们客户即使查询珀金质量保证书，也应在实验前检查各个试剂是否结晶、物品是否在有效保质期内等是否正常，以保证试验数据的可靠性。
 
　　总之，兔血清总补体ELISA试剂盒是一种简单、敏感、特异的实验试剂，可用于检测血清中总补体含量，是生物医学、生物学和医药工业研究中重要的实验工具。