影响兔ELISA试剂盒实验的因素

　　兔ELISA试剂盒主要由包括试剂盒盒体、酶标板、标准品、样品、懈氏试剂、缓冲液、洗涤液、显色剂和停止剂等组成。试剂盒的盒体上标有试剂盒编号、试剂名称、制造商等基本信息，用于方便用户识别和区分不同试剂盒。
 
　　酶标板是试剂盒中的核心部件，通常采用96孔板的形式，每一孔都涂有特定的抗原、抗体或其它蛋白质。标准品是与待检样品相同或类似的蛋白质，用来检测和定量待测样品中的抗体或抗原。样品是待测标本，可以是免疫学实验室中的兔血清，也可以是其它液体、组织、细胞等。
 
　　免疫酶标法的原理是将待测样品加到涂有抗原或抗体的酶标板中，通过特异性反应将待测物质捕获在酶标板上；然后加入可与待测物质结合的标记物，如酶、金标等，使其与被捕获的物质产生特异性结合；加入显色底物如TMB，用于检测标记物的酶活性，产生颜色变化。液体样品从血浆、血清或其它生物样品中分离出来，加到酶标板中，与涂有同种或异种来源的抗原或抗体结合，用酶标法检测其是否含有特异性免疫球蛋白、抗体等。
 
　　在试剂盒中，常用的酶标法包括直接法、间接法、竞争法、夹心法等。在直接法中，样品直接与定量抗原或抗体反应；在间接法中，用兔血清中特异性抗体与抗原反应，然后用特异性标记分子如HRP等检验抗原特异性的抗体；在竞争法中，添加适当浓度的特异性抗体、酶标记的抗原及待测物竞争反应，以判断待测物在样品中的存在量；在夹心法中，兔抗体与特定抗原反应后，用兔抗体和酶标记的抗兔IgG标记。
 
　　兔ELISA试剂盒实验的结果受操作影响很大，每个步骤包括加样，温育，洗涤，显色，酶标仪读数均应认真负责才能充分发挥ELISA的高灵敏，强特异的优点。我们技术人员通过几年的实验观察，认为影响ELISA实验的因素有如下三方面。
 
　　一、、抗原、抗体活性对效价的影响：
 
　　主要是试剂中抗体(或抗原)的效价降低或失活，结果不易判断。再有ELISA试剂盒灵敏度高，对杂质的反应灵敏度也高，实验中空白对照OD值偏高或假阳性；酶结合物浓度过高，也会导致OD值假性增高。试剂保存不当或活性下降；试剂盒灵敏度高。
 
　　二、、试验仪器：
 
　　1、加样器是否经过校正，酶免测定血清用血量很少，如手工加样器的性能不好，吸取样品不，会使结果忽高忽低。
 
　　2、实验器具被污染；酶标滴加在孔壁上，洗板未洗净；混用洗液或洗液稀释错误；洗液瓶中、管道或配置洗液的水中有霉菌；读数时酶标板底部有水蒸气凝结；洗液瓶、废液瓶混用；读数过程中板孔中有气泡；酶标仪偏差均可引起假阳性结果。
 
　　三、操作：
 
　　1、检测前先将兔ELISA试剂盒从冰箱取出置室温平衡20min后使用，试剂用完及时放回冰箱冷藏，以免造成试验结果假性降低；孵育温度过低；
 
　　2、抗原与抗体反应达到平衡，依赖于温度与时间。温度高于45℃易引起失活及标记物脱落，温度低于4℃，影响反应速度。
 
　　3、加入标本后未进行必要的混匀；标本稀释错误；加样量不正确；冷冻标本未溶解混匀；标本中含有防腐剂均可引起阳性对照读数不正常。
 
　　简而言之，由于兔ELISA试剂盒实验的影响因素较多，在实际工作中操作规范、仔细，避免和排除各种因素的影响，使之得到准确可靠的检验结果。